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高压蒸汽灭菌锅的使用方法

作者: 发布日期:2018-04-18 访问次数:247

1、器材

牛肉膏蛋白胨培养基,培养皿(6套一包),手提式高压蒸汽菌锅等。2、操作步骤

1.首先将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。

2.放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

3.加盖,并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。

4.用电炉或煤气加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。本实验用1.05kg/cm2,121.3℃,20分钟灭菌。

5.灭菌所需时间到后,切断电源或关闭煤气,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染。

6.将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时,经检查若无杂菌生长,即可待用。

稀释倒平板法

先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000…),然后分别取不同稀释液少许,与已溶化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。倒平板的两种方法持皿法

⑴将若干无菌培养皿叠放在左侧,便于拿取。

⑵点燃煤气灯,将火焰调到适中(空气不要太大,以免气流过急)。

⑶倒平板时,先用左手握住三角瓶的底部,倾斜三角瓶,用右手旋松棉塞,然后用右手的小指和手掌边缘夹住棉塞并将它拔出(切勿将棉塞放在桌面上),随之将瓶口周缘在火焰上过一下(不可灼烧,以防爆裂,以杀死可指沾在瓶口外的杂菌。然后将三角瓶从左手传至右手中(用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部),在这操作过程中瓶口应保持在离火焰2~3处,瓶口始终向着火焰。左手拿起一套培养皿,用中指、无名指和小指托住培养皿底部,用食指和大拇指夹住皿盖并开启一缝,恰好能让三角瓶伸入,随后倒出培养基。一般约倒入12ml的培养基即可铺满整个皿底。盖上皿盖,置水平位置等凝。然后再将三角瓶移至左手,瓶口再次过火并塞紧棉塞。

平板培养基的冷凝方法有两种,一种是将平板一个个摊开在桌面上冷凝,另一方法是将几个平板叠在一起冷凝。前者冷凝速度较快,在室温较高时采用;而后者冷凝速度较慢,可在室温较低时采用,其优点是形成冷凝水少,尤其适用于平板划线等的需要。

叠皿法

此法步骤与持皿法基本相同。不同点是左手不必持培养皿,而是将培养皿叠放在煤气灯的左侧并靠近火焰,用右手拿住三角瓶的底部,左手的掌背对着瓶口,用小指与无名指夹住瓶塞,将其拔出,随即使瓶口过火,同时用左手开启最上面的皿盖,倒入培养基,盖上皿盖即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平板。在操作过程中,瓶口应向着火焰保持倾斜状,以防空气中微生物的污染。


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